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酶標儀(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的實驗技術,用于檢測和定量分析生物樣品中特定分子的存在或濃度,如蛋白質、抗體、激素等。它主要基于酶與抗原或抗體之間的特異性結合反應來實現(xiàn)。
酶標儀的基本使用方法如下:
準備試劑和樣品:根據(jù)實驗的要求準備好所需的試劑和樣品,包括酶標板、酶標板涂層物、抗原或抗體溶液、標準曲線樣品和待測樣品等。
酶標板涂層:將涂有特定抗原或抗體的酶標板孔進行涂層。涂層可以通過直接涂層法、間接涂層法或夾心法等不同的方法進行。
洗滌:用洗滌緩沖液洗滌酶標板,去除未結合的物質,以減少非特異性背景信號。
孵育:將待測樣品和標準曲線樣品加入酶標板的孔中,使其與涂層的抗原或抗體發(fā)生特異性結合反應。孵育時間和溫度根據(jù)實驗要求設定。
洗滌:再次用洗滌緩沖液洗滌酶標板,去除未結合的物質。
反應:加入特定的酶標記物(通常是辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶),使其與待測樣品中的目標物質結合。
洗滌:進行*后一次洗滌步驟,去除未結合的酶標記物。
反應停止:加入適當?shù)姆磻V挂?,使酶標記物的反應停止?/span>
讀取結果:使用酶標儀測量吸光度,根據(jù)標準曲線計算樣品中目標物質的濃度。
需要注意的是,具體的酶標儀使用方法可能會因不同型號和品牌而有所差異,因此在進行實驗前,應仔細閱讀并按照儀器和試劑的說明書進行操作。